仓鼠Elisa试剂盒样品稀释的方法和步骤

更新时间：2022-05-17

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　　仓鼠Elisa试剂盒检测的原理是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验。计算方法是以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

　　仓鼠Elisa试剂盒在没有去离子水或双蒸水时，可以使用娃哈哈纯净水配制溶液，切勿使用自来水。

　　1.样品稀释：酶联免疫反应是一种敏感性很高的反应，如果血清不稀释，不可避免会产生很强的非特异性反应，出现假阳性。因此，国外检测血清抗体的试剂盒，均规定将血清稀释至适当的倍数，以降低非特异性反应，使特异性的抗原抗体反应充分体现出来。样品稀释倍数均通过大量试验确定，以保证试验的灵敏度和特异性。但是，有些用户未能严格按使用说明书操作，如产品应取10u1样品进行稀释，个别用户取5u1甚至1u1样品进行稀释，由于吸嘴上不可避免地沾有样品以及微量移液器的精度不够，因此造成样品稀释倍数不准确，检测结果出现问题。

　　2.试剂盒平衡：试剂盒中所有试剂和板条均应在试验前平衡至室温（约25℃），一般需在室温放置20~30分钟以上。平衡时间太短会造成试剂混匀不够，样品孵育时间相对缩短，ELISA反应不够充分。冬季室温低，可将试剂盒打开盒盖置37℃温箱20分钟。稀释前、后的样品需要充分混匀，所有试剂在加样前也须摇匀，以保证试验的均一性。

　　3.加样：尽量操作规范，将液体垂直悬空快速加入到微孔板中，避免加到孔避上。加完试剂后用手适当振荡或在桌面适当作圆周运动，使孔内试剂充分混匀，盖好盖板膜。

　　4.洗板：洗液尽量不要溢出孔外；加洗液后要静置10-15s，甩去板孔中洗液后，一定要用力拍干；及时更换吸水纸，尤其是拍过酶标记物的吸水纸一定要弃去，否则可能影响试验结果。

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