口蹄疫A型抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
使用说明书
【产品名称】
通用名:口蹄疫A型抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A(ELISA)
【包装规格】×2/盒96T×1/盒、96T、96T×5/盒
【预期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病,其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。
本试剂用于检测牛、羊、猪血清中口蹄疫A型抗体,可用于口蹄疫A型疫苗免疫效果评价。
【原 理】
本试剂盒由预包被口蹄疫A型抗体的酶标板、抗体工作液、抗原液、酶标记物及其他配套试剂组成,应用阻断酶联免疫法(ELISA)原理检测牛、羊、猪血清样本中口蹄疫A型抗体。实验时将稀释的样本与抗原液同时加入酶标板中孵育,样本中的抗体与酶标板上的抗体竞争抗原,阻断抗原与板的结合;经洗涤后,再加抗体工作液孵育;经洗涤后加入酶标记物孵育;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加底物液,与酶标结合物反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有口蹄疫A型抗体。
【试剂盒组成】
序号 | 名称 | 规格/96T×1 | 规格/96T×2 | 规格/96T×5 |
1 | 酶标记物 | 6ml×1(红盖) | 11ml×1(红盖) | 26ml×1(红盖) |
2 | 抗体工作液 | 6ml×1(蓝盖) | 11ml×1(蓝盖) | 26ml×1(蓝盖) |
3 | 抗原液 | 6ml×1(黑盖) | 11ml×1(黑盖) | 26ml×1(黑盖) |
4 | 20X浓缩洗涤液 | 40ml×1(白盖) | 40ml×2(白盖) | 200ml×1(白盖) |
5 | 底物液A | 6ml×1(白盖) | 11ml×1(白盖) | 26ml×1(白盖) |
6 | 底物液B | 6ml×1(黑盖) | 11ml×1(棕盖) | 26ml×1(黑盖) |
7 | 终止液 | 6ml×1(黄盖) | 11ml×1(黄盖) | 26ml×1(黄盖) |
8 | 阳性对照 | 1.0 ml×1(红盖) | 1.5 ml×1(红盖) | 2.0 ml×1(红盖) |
9 | 阴性对照 | 1.0 ml×1(绿盖) | 1.5 ml×1(绿盖) | 2.0 ml×1(绿盖) |
10 | 酶标板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
11 | 盖板膜 | 1 | 2 | 5 |
12 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
13 | 说明书 | 1 | 1 | 1 |
14 | 稀释板 | 1 | 2 | 5 |
【储存及有效期】 2~8℃保存,有效期12个月。
包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限为2个月。
【适用仪器】 含450nm、630nm波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。
2.用工作洗涤液将待检牛、羊先按32倍稀释(如5μl血清加入155μl工作洗涤液中,混匀),待检猪血清按16倍稀释(如5μl血清加入75μl洗涤液中,混匀),阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条,设阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl,样品孔每孔先加入工作洗涤液25ul,再加入稀释后的样品25μl;最后都加入抗原液50μl。
注:加入抗原后牛、羊样本稀释比例相当于1:128,猪样本稀释比例相当于1:64。
4.震荡混匀10秒,盖好盖板膜,置37℃(推荐水浴)避光反应30分钟。
5.甩去孔内液体,每孔加350μl工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,最后一次拍干。
6.每孔加抗体工作液50μl,盖好盖板膜,置37℃避光反应30分钟。
7.洗涤,同步骤5。
8.每孔加酶标记物50μl,盖好盖板膜,置37℃避光反应30分钟。
9.洗涤,同步骤5。
10.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,盖好盖板膜,置37℃避光反应15分钟。
11.每孔加终止液50μl,混匀,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。
【参考值】 实验正常的情况下,阴性对照A值≥1.0,阳性对照A值≤阴性对照A值×50%。
【检验结果的解释】
1.PI(阻断率)=(1- 阴性对照平均A值)×100%,PI≥50%为阳性;PI<50%为阴性。
2.本实验检测牛、羊血清结果为阳性时表明待检样本中含有口蹄疫A型抗体,且效价高于1:128,达到保护水平;反之检测结果为阴性时表明待检样本中不含有口蹄疫A型抗体,或效价低于1:128,未达到充足保护水平。
3.本实验检测猪血清结果为阳性时表明待检样本中含有口蹄疫A型抗体,且效价高于1:64,达到保护水平;反之检测结果为阴性时表明待检样本中不含有口蹄疫A型抗体,或效价低于1:64,未达到充足保护水平。
4.如需了解样本抗体的最终效价,可将样本进行梯度稀释,使PI≥50%的最高稀释比例即为该样本抗体的最终效价。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性牛、羊、猪血清中口蹄疫A型抗体,根据PI值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
该试剂盒不适用于合成肽疫苗免疫抗体效价评估