线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性测试盒操作程序

更新时间：2021-04-08

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线粒体呼吸链复合体Ⅳ活性测试盒操作程序
测定意义：线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素C氧化酶，也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责催化还原型细胞色素C的氧化，并最终把电子传递给氧，生成水。

测定原理：还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素C生成氧化型细胞色素C，因此550nm光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。

需要的仪器，耗材:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

样本处理
1. 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1.0 mL 提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。4 ℃ 600g 离心 10min。

2. 将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000g 离心 15min。

3. 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅳ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。

4. 在沉淀中加入 400uL 提取液，超声波破碎（功率 20%，超声 5 秒，间隔 10 秒，重复 15 次），用于复合体Ⅳ 酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。

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