(GSH)谷胱甘肽含量,小鼠酶免检测试剂盒实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠谷胱甘肽(GSH)水平。用纯化的小鼠谷胱甘肽(GSH)捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入小鼠谷胱甘肽(GSH),再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠谷胱甘肽(GSH)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠谷胱甘肽(GSH)含量。
操作步骤
- 标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。
- 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
- 加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。
- 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
- 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
- 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
- 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
- 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
- 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%和15% 。
检测范围:
0.25 ng/mL – 8 ng/mL。
灵敏度:
低检测浓度小于0.1 ng/mL。
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存: 2-8℃。
2.有效期: 6个月