完好的
人ELISA试剂盒包含哪些组分呢?
在人ELISA试剂盒实验中,只需遵从它应有的规矩才干更好的完成实验,对此,为您分析了保证实验效果的几大基础:
1.要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都康复到室温,以使效果更安稳。
2.实验时,要使底物避光保存。
3.用枪罗致液体时速度不能太快,避免发作气泡而使罗致量不。
4.罗致液体时,要用量程和需要量靠近的枪去吸,削减过失。
5.要保证移液枪的性,过失不能超过2%。可用水和电子天平进行确认。但有专。人员进行纠正。
6.要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。罗致不同的液体后,要更换枪头。即使是罗致标准品时。
ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等
完好的人ELISA试剂盒包含以下各组分:
1.已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)
2.酶符号的抗原或抗体(结合物);
3.酶的底物;
4.阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考规范品和控制血清(定量测定中);
5.结合物及标本的稀释液;
6.洗刷液
7.酶反响停止液。
人ELISA试剂盒操作过程:
1. 加规范品:在酶标包被板上设规范品孔,依次参加不同浓度的规范品50ul(主张每个浓度做2个平行孔)
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其他各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl,然后再加样品亲和素10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,悄悄晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗刷液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5. 洗刷:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗刷液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:除空白孔外每孔参加酶标试剂50μl。
7. 温育:操作同3。
8. 洗刷:操作同5。
9. 显色:ELISA试剂盒每孔先参加显色剂A50μl,再参加显色剂B50μl,悄悄震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 停止:每孔加停止液50μl,停止反响(此刻蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加停止液后15分钟以内进行。