植物Elisa试剂盒需要遵循这几个细节

更新时间：2019-09-24

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　　植物Elisa试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被植物活性氧（ROS）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并*洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物活性氧（ROS）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

　　植物Elisa试剂盒需要遵循这几个细节：抗原或抗体能吸附于固相载体外表，并坚持其免疫学活性，抗原或抗体可通过共价键与酶衔接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能坚持其免疫学和酶学活性；酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据参加底物的色彩反响来断定是否有免疫反响的存在，并且色彩反响的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，可根据已知浓度的抗原或抗体的色彩反响的深浅制作规范曲线并依此计算出不知道样品中抗体或抗原的浓度。

　　样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。

　　植物Elisa试剂盒采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度陡段，即曲线几乎成直线的范围内。

　　标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999。

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